Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的处理过程中逐渐扩展

从第一次消失肾脏自身血清到消失1改进型哮喘临床研究成果征状的的工业发展率在学龄前末期就有很好的所述，多个肾脏自身血清白血病的学龄前之中有70%在血清转换后10周内患上哮喘，而随访15年的学龄前这一比重减小到84%。相对来说之下，占临床研究成果1改进型哮喘一半以上的改进型1改进型哮喘的复发机制还很难给予充分的研究成果。

越来越多的人开始应用于分期系统来定义1改进型哮喘的的工业发展：有机锥体在消失多种肾脏自身血清时转到第1阶段，消失食欲异常时转到第2阶段，消失征状时转到第3阶段。一些多发肾脏自身血清白血病的有机锥体，在1期和2期，的工业发展速度快，并工业发展为复发的1改进型哮喘。我们之前所述了组合成成员在首次样品到多种肾脏自身血清取样后至极多10年无哮喘的较快的工业发展者，这组成员病变人数极多，但特质非常明确。随后，我们发现肾脏自身抗原特异性CD8+T细胞内加成在的工业发展减迟的病变之中理论上不存在，但在近期复发和长期存在的哮喘病变之中很容易样品到。这显然证明，与的工业发展病变相对来说，这些病变自身免疫加成的调节增强。

早期研究成果证明，尽管调节性T细胞内(Treg)数量经常性，但哮喘病变存在一些系统瑕疵，其之中包含对IL-2的加成能力下降。此外，哮喘病变之中的畸变CD4+T细胞内显然对调节越来越具抵抗性，锥体现为畸变T细胞内的诱发移向，共存激发的Treg和锥体外激发的诱导Treg，以及抗原经历的CD4+T细胞内之中IL-2加成移向。本研究成果的目的是所述了CD4+调节性T细胞内(Treg)在领头极减迟的工业发展者之中的特质，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

新方法：BOX研究成果是一项以青年人为基础的两端研究成果，在21岁所列确诊的病变亲属之中检查1改进型哮喘的危险状况。我们之前所述了长期减迟的工业发展者的特质，他们保持多重肾脏自身血清白血病超过10年，但很难消失哮喘的临床研究成果征状，迟性或非展开性自身免疫。随后，10名再次保持无哮喘并愿意给予大量肾脏取样的减迟的工业发展者纳入T和B细胞内系统透彻研究成果。在现阶段的研究成果之中，8名迟的工业发展者(SP组成员)，之中位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肾脏自身血清白血病。所有的参与者都处于1改进型哮喘的工业发展的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身血清对某些抗原的白血病加成，然而，一名病变从未处于2期至极多6年，但很难消失临床研究成果征状，一名病变被病人为哮喘，该受试者72岁，在采集筛选中取样时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在数据透彻研究成果之中对该NAD展开了单独透彻研究成果。分离外周血单个核细胞内(PBMCs)，采用多参数流式细胞内奥义和T细胞内诱发筛选透彻研究成果NAD之中Treg的频率、表改进型和系统。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、举例来说和回归)展开无统筹聚类透彻研究成果，透彻研究成果Treg表改进型。

结果：与健康NAD相对来说，来自迟的工业发展锥体的心灵CD4+T细胞内的统筹聚类推测，转录的心灵CD4+ Treg频率减小，与糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)表述减小有关。一名HbA1c下降的病变与的工业发展减迟者和最简单的依此组成员相对来说，Treg谱有所完全相同。系统透彻研究成果证明，与健康NAD相对来说，来自减迟的工业发展锥体的Treg细胞内内的CD4+畸变T细胞内诱发明显损害。锥体现为对畸变CD4+T细胞内CD25和CD134表述的诱发减小。

所示1 透彻的表改进型透彻研究成果推测，CD4+Treg亚改进型在迟的工业发展队列之中减小。由FlowSOM降解的Treg室，聚集在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据上标物表述鉴定出10个元簇:心灵T细胞内_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞内;HLA-DR + GITR +心灵T细胞内;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)应用于9个完全相同Treg上标降解的10个元簇的MST。每个键值值得一提的是一个炮兵部队(100个炮兵部队)，越来越大的元炮兵部队(10个元炮兵部队)在键值组成员四周剪裁。每个键值之中的年糕所示坚称单个上标的表述级别。(b)每个元聚类的热所示，以推测整锥体上标表述。(c, d)为HD组成员(c)和SP组成员(d)降解所示，以及FlowSOM辨别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说数量级为每个metacluster罐两条路线所示(数量级> 0.05%)明确为HD和SP组成员:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞内(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞内(l)。深蓝色圆点值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩筛选。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 应用于CITRUS的预测模改进型证实，Treg频率的减小是的工业发展减迟的标志。分级门控(a - f)和柑橘透彻研究成果(g-k)比较SP参与者和最简单的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的值得一提的是性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3石英砂，然后通过HLA-DR和GITR表述展开分离，模拟器FlowSOM社会阶层。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)组成员以及NADSP 606(深蓝色)之中CD25+ cd127的频率摘要所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控兄集的罐两条路线所示;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)龙眼簇螺旋状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表述强度着色，箭头突出的簇被辨别为SP和HD队列之间的完全相同。(j)罐两条路线所示推测了在SP(蓝点)和HD(灰点)组成员之中，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相对来说数量级(比重)。(k)直方所示推测每个簇的表改进型(粉红色)和Treg上标相对来说表述与氛围表述(粉红色);上列，寄存器Treg_3;请注意一行，寄存器Treg_4。氛围与所有其他簇之中上标的表述有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩筛选

所示3 与健康献血者相对来说，的工业发展减迟者心灵treg的GITR减小。每个心灵CD4+T细胞内元簇(心灵T细胞内_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞内;HLA-DR + GITR +心灵T细胞内;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个表述上标的推移。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的表述热所示(sp606不包含在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇之中所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(深蓝色)的FlowSOM GITR表述相联，推测直方所示(c)和摘要所示(d)。Wilcoxon配对符号秩和筛选，p< 0.07(深蓝色)所有NAD包含，p< 0.05(粉红色)NADSP 606和最简单的HD不包含在测试之中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs之中GITR表述，从分级门控，从所有HD(灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(深蓝色)相联，推测直方所示(e)和摘要所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩筛选

所示4 来自减迟的工业发展的CD4+ treg细胞内控制畸变CD4+T细胞内的能力下降。SP组成员用粉红色的两条路线和圆点坚称，HD组成员用灰色的两条路线和圆点坚称，深蓝色的两条路线/圆点坚称NADsp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内展开分选。CD4+CD25−(这样的话者)被上标为CFSE, Treg按观察的比重硫酸铜。用抗CD3 /28微珠诱导细胞内，培育出3天后展开流式细胞内奥义样品。(a-d)与CD4+这样的话者相对来说应的treg培育出(自锥体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD这样的话者培育出。(a,b,f) CFSE诱导(a,e)和CFSE诱发百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发百分比。应用于白血病依此(转录的拥护细胞内不含treg)量度诱发百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差透彻研究成果。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 畸变CD4+T细胞内对减迟的工业发展的T细胞内诱导的诱发越来越敏感性。SP组成员用粉红色的两条路线和圆点坚称，HD组成员用灰色的两条路线和圆点坚称，深蓝色的两条路线/圆点坚称NADsp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内展开分选。CD4+CD25−(这样的话者)被cfsel上标，treg按观察的比重硫酸铜。用抗CD3 /28微珠诱导细胞内，培育出3天后展开流式细胞内奥义(CD25反染)和细胞内因兄透彻研究成果。HD Treg与HD、SP或sp606这样的话者共同培育出。(a,b) CFSE诱导(a)和CFSE诱发三份(b)。(c,d) CD25诱发三份(c)和CD134诱发三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出之中的表述。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差透彻研究成果。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们计算出来的结论是，来自减迟的工业发展兄的诱导心灵CD4+Treg在GITR表述之中给予了扩展和丰富，强调了进一步研究成果Treg在1改进型哮喘不确定性有机锥体之中的举例来说的必要。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28